〜 VP(Voges-Proskauer)試験〜

大阪府立 呼吸器・アレルギー医療センター　浅田　薫



【目　的】

　Klebsiella ,Enterobacter ,Hafnia などの腸内細菌や腸炎ビブリオ(Vibrio parahaemolyticus ),Listeriaなどの鑑別。


【培地組成】

VP半流動培地(池村・篠川／1965)
　・ 酵母エキス 1.0g
　・ カゼインペプトン 7.0g
　・ ソイペプトン 5.0g
　・ ブドウ糖 10.0g
　・ 塩化ナトリウム 5.0g
　・ 寒天 3.0g
　・ 精製水 　　　1000ml
　・ pH7.2

※加温溶解後，pHを調整し，小試験管に3mlずつ分注し121℃15分間滅菌の後，高層に固める。


【検査方法】

　白金線を用いて，コンタミネーションに注意しながら微量釣菌し，穿刺する。37℃で18−24時間培養後，VP試験を行う。
　VP試験には，A液(6％α-ナフトール・アルコール)とB液(クレアチン加40％KOH)を用いる。
　培養後の培地表面に，A液を4滴，B液を2滴滴下し判定を行う。
　判定は数分から15分で明瞭な呈色を示すが，最終判定は1時間で行う。
　・ 陽性：試験層が赤−深紅色
　・ 陰性：原色または銅色

【原理】

　ブドウ糖→細菌のEM系へ→ピルビン酸産生→ブチレングリコール発酵→
　アセチルメチルカルビノール(アセトイン)形成
　アセチルメチルカルビノール＋KOH＋酸素→ジアセチル(赤色)

※α-ナフトール，クレアチンは酸化促進剤として働く。
※Yersiniaは培養温度により，反応が異なるので2本に接種し，22−25℃と37℃で48時間以上培養し判定する。


【VP試験その他の方法】

　ブイヨンを用いる方法：MR-VPブイヨン→微量菌接種→A液B液(激しく混和・斜面位30分)にて反応を見る。

※明らかなピンクまたは赤色を陽性とする。


【参考書籍】

　腸管系病原菌の検査法・第2版：善養寺 浩，坂井千三(共著)
　図解臨床細菌検査・第2版：坂崎利一(編集)，田村和満，吉崎悦郎，横沢光博，三木寛二(著)
　栄研マニュアル・第10版：栄研化学株式会社
　製品要覧�T・第22版：日水製薬株式会社
　BBL粉末培地：Becton Dickinson Overseas Inc.